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基因文库中的目的基因的筛选  

2010-04-16 10:37:29|  分类: 疑难解答 |  标签: |举报 |字号 订阅

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如何从庞大的基因文库中找到目的基因呢?

[1] 帮助学生建立基因文库的概念。基因文库是指用重组DNA技术将某种生物细胞的总DNA 或染色体DNA的所有片断随机地连接到基因载体上,然后转移到适当的宿主细胞中,通过细胞增殖而构成各个片段的无性繁殖系(克隆),在制备的克隆数目多到可以把某种生物的全部基因都包含在内的情况下,这一组克隆的总体就被称为某种生物的基因文库。由于制备DNA片段的切点是随机的,所以每一克隆内所含的 DNA片段既可能是一个或几个基因,也可能是一个基因的一部分或除完整基因外还包含着两侧的邻近DNA顺序。

[2] 了解寻找目的基因的方法。从基因文库中筛选某一克隆的常用办法是分子杂交。先把属于一个文库的细菌或噬菌体以较低密度接种在培养皿上以取得相当分散的菌落或噬菌斑,然后用硝酸纤维滤膜吸印,使培养皿和滤膜的相对应的位置上具有相同的克隆,同时另行制备供分子杂交用的探针。为了筛选真核生物的某种基因,常从它的转录产物mRNA经反向转录合成相应的互补 DNA(cDNA),再加入用32P标记的核苷三磷酸,用DNA多聚酶I切口移位方法制成有同位素标记的探针,把探针 DNA和硝酸纤维滤膜上的菌落或噬菌体分别进行变性处理,然后进行分子杂交。再将 X光底片覆盖在经过处理的滤膜上以进行放射自显影。从培养皿上找出和 X光底片上的黑点相对应的菌落或噬菌斑,这些菌落或噬菌体中便包含着所需要的基因。经过扩增便能得到大量的细菌或噬菌体,从中可以分离出所需基因的DNA片段。


 

 

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